Amazonian soil fungi are efficient degraders of glyphosate herbicide; novel isolates of Penicillium, Aspergillus, and Trichoderma / Os fungos do solo amazônico são degradadores eficientes do herbicida glifosato; novos isolados de Penicillium, Aspergillus e Trichoderma

Pesticide residues that contaminate the environment circulate within the hydrological cycle can accumulate within the food chain and cause problems to both environmental and human health. Microbes, however, are well known for their metabolic versatility and the ability to degrade chemically stable substances, including recalcitrant xenobiotics. The current study focused on bio-prospecting within Amazonian rainforest soils to find novel strains fungi capable of efficiently degrading the agriculturally and environmentally ubiquitous herbicide, glyphosate. Of 50 fungal strains isolated (using culture media supplemented with glyphosate as the sole carbon-substrate), the majority were Penicillium strains (60%) and the others were Aspergillus and Trichoderma strains (26 and 8%, respectively). All 50 fungal isolates could use glyphosate as a phosphorous source. Eight of these isolates grew better on glyphosate-supplemented media than on regular Czapek Dox medium. LC-MS revealed that glyphosate degradation by Penicillium 4A21 resulted in sarcosine and aminomethylphosphonic acid.

Resíduos de agrotóxicos que contaminam o meio ambiente circulam no ciclo hidrológico, podendo se acumular na cadeia alimentar e causar problemas tanto à saúde ambiental quanto humana. Por sua vez, microrganismos são bem conhecidos por sua versatilidade metabólica e capacidade de degradar substâncias quimicamente estáveis, incluindo xenobióticos recalcitrantes. O estudo atual se concentrou na bioprospecção nos solos da floresta amazônica para encontrar novas linhagens de fungos capazes de degradar com eficiência o herbicida onipresente na agricultura e no meio ambiente, o glifosato. Entre os 50 fungos isolados (usando meio de cultura suplementado com glifosato como única fonte de carbono), a maioria eram isolados do gênero Penicillium (60%) e os outros eram isolados de Aspergillus e Trichoderma (26 e 8%, respectivamente). Todos os 50 isolados de fungos foram capazes de usar glifosato como fonte de fósforo. Oito desses isolados cresceram melhor em meio suplementado com glifosato do que em meio Czapek Dox regular. LC-MS revelou que a degradação do glifosato por Penicillium 4A21 resultou nos metabólitos sarcosina e ácido aminometilfosfônico.

Amazonian soil fungi are efficient degraders of glyphosate herbicide; novel isolates of Penicillium, Aspergillus, and Trichoderma

Abstract Pesticide residues that contaminate the environment circulate within the hydrological cycle can accumulate within the food chain and cause problems to both environmental and human health. Microbes, however, are well known for their metabolic versatility and the ability to degrade chemically stable substances, including recalcitrant xenobiotics. The current study focused on bio-prospecting within Amazonian rainforest soils to find novel strains fungi capable of efficiently degrading the agriculturally and environmentally ubiquitous herbicide, glyphosate. Of 50 fungal strains isolated (using culture media supplemented with glyphosate as the sole carbon-substrate), the majority were Penicillium strains (60%) and the others were Aspergillus and Trichoderma strains (26 and 8%, respectively). All 50 fungal isolates could use glyphosate as a phosphorous source. Eight of these isolates grew better on glyphosate-supplemented media than on regular Czapek Dox medium. LC-MS revealed that glyphosate degradation by Penicillium 4A21 resulted in sarcosine and aminomethylphosphonic acid.

Resumo Resíduos de agrotóxicos que contaminam o meio ambiente circulam no ciclo hidrológico, podendo se acumular na cadeia alimentar e causar problemas tanto à saúde ambiental quanto humana. Por sua vez, microrganismos são bem conhecidos por sua versatilidade metabólica e capacidade de degradar substâncias quimicamente estáveis, incluindo xenobióticos recalcitrantes. O estudo atual se concentrou na bioprospecção nos solos da floresta amazônica para encontrar novas linhagens de fungos capazes de degradar com eficiência o herbicida onipresente na agricultura e no meio ambiente, o glifosato. Entre os 50 fungos isolados (usando meio de cultura suplementado com glifosato como única fonte de carbono), a maioria eram isolados do gênero Penicillium (60%) e os outros eram isolados de Aspergillus e Trichoderma (26 e 8%, respectivamente). Todos os 50 isolados de fungos foram capazes de usar glifosato como fonte de fósforo. Oito desses isolados cresceram melhor em meio suplementado com glifosato do que em meio Czapek Dox regular. LC-MS revelou que a degradação do glifosato por Penicillium 4A21 resultou nos metabólitos sarcosina e ácido aminometilfosfônico.

Amazonian soil fungi are efficient degraders of glyphosate herbicide; novel isolates of Penicillium, Aspergillus, and Trichoderma / Os fungos do solo amazônico são degradadores eficientes do herbicida glifosato; novos isolados de Penicillium, Aspergillus e Trichoderma

Abstract Pesticide residues that contaminate the environment circulate within the hydrological cycle can accumulate within the food chain and cause problems to both environmental and human health. Microbes, however, are well known for their metabolic versatility and the ability to degrade chemically stable substances, including recalcitrant xenobiotics. The current study focused on bio-prospecting within Amazonian rainforest soils to find novel strains fungi capable of efficiently degrading the agriculturally and environmentally ubiquitous herbicide, glyphosate. Of 50 fungal strains isolated (using culture media supplemented with glyphosate as the sole carbon-substrate), the majority were Penicillium strains (60%) and the others were Aspergillus and Trichoderma strains (26 and 8%, respectively). All 50 fungal isolates could use glyphosate as a phosphorous source. Eight of these isolates grew better on glyphosate-supplemented media than on regular Czapek Dox medium. LC-MS revealed that glyphosate degradation by Penicillium 4A21 resulted in sarcosine and aminomethylphosphonic acid.

Resumo Resíduos de agrotóxicos que contaminam o meio ambiente circulam no ciclo hidrológico, podendo se acumular na cadeia alimentar e causar problemas tanto à saúde ambiental quanto humana. Por sua vez, microrganismos são bem conhecidos por sua versatilidade metabólica e capacidade de degradar substâncias quimicamente estáveis, incluindo xenobióticos recalcitrantes. O estudo atual se concentrou na bioprospecção nos solos da floresta amazônica para encontrar novas linhagens de fungos capazes de degradar com eficiência o herbicida onipresente na agricultura e no meio ambiente, o glifosato. Entre os 50 fungos isolados (usando meio de cultura suplementado com glifosato como única fonte de carbono), a maioria eram isolados do gênero Penicillium (60%) e os outros eram isolados de Aspergillus e Trichoderma (26 e 8%, respectivamente). Todos os 50 isolados de fungos foram capazes de usar glifosato como fonte de fósforo. Oito desses isolados cresceram melhor em meio suplementado com glifosato do que em meio Czapek Dox regular. LC-MS revelou que a degradação do glifosato por Penicillium 4A21 resultou nos metabólitos sarcosina e ácido aminometilfosfônico.

Biomarcadores enzimáticos e histológicos em brânquias de Ucides cordatus (Linnaeus, 1763) (Crustacea, Brachyura, Ucididae) indicativos de impactos ambientais em uma região portuária do nordeste do Brasil / [Enzymatic and histological biomarkers in Ucides cordatus (Linnaeus, 1763) (Crustacea, Brachyura, Ucididae) gills indicative of environmental impacts in a port region of northeastern Brazil]

Objetivou-se neste estudo analisar biomarcadores histológicos e bioquímicos em brânquias de U. cordatus indicativos de impactos na Baía de São Marcos. Caranguejos foram coletados em quatro áreas na Baía de São Marcos: A1= Ilha dos Caranguejos (com baixo impacto); A2= Coqueiro, A3= Porto Grande, A4= Cajueiro (áreas potencialmente impactadas). Mediram-se os dados biométricos de cada exemplar de caranguejo. Amostras de brânquias foram submetidas à técnica histológica padrão e homogeneizadas em tampão fosfato, e o sobrenadante foi utilizado para análise das enzimas glutationa-S-transferase (GST) e catalase (CAT). A biometria indicou que os caranguejos de A1 são significativamente (P<0,05) maiores e mais pesados do que os caranguejos das áreas A2, A3 e A4. As alterações branquiais (rompimento das células pilastras, deformação do canal marginal, deslocamento da cutícula e necrose) foram significativamente (P˂0,05) mais frequentes em caranguejos de A2, A3 e A4 do que nos caranguejos de A1. As atividades enzimáticas da GST e CAT nos caranguejos apresentaram diferença significativa (P<0,05) entre as áreas de coletas, com padrão similar ao observado para as alterações branquiais. Os biomarcadores analisados mostraram que os caranguejos estão sob diferentes níveis de impactos (A4>A3>A2>A1) ao longo da Baía de São Marcos.(AU)

The objective of this study was to analyze histological and biochemical biomarkers in U. cordatus gills indicative of impacts in São Marcos Bay. Crabs were collected from four areas in São Marcos Bay: A1=Ilha dos Caranguejos (with low impact); A2=Coqueiro, A3=Porto Grande, A4=Cajueiro (potentially impacted areas). The biometric data of each specimen was measured. Gill samples were submitted to standard histological technique and homogenized in phosphate buffer, and the supernatant was used for analysis of glutathione S-transferase (GST) and catalase (CAT) enzyme activity. Biometric data indicated that crabs found in A1 are significantly (P<0.05) larger and heavier than crabs found in A2, A3 and A4 areas. Gill alterations (rupture of pilaster cells, Dilation of the marginal channel, Cuticle Rupture and necrosis) were significantly (P˂0.05) more frequent in the crabs in A2, A3 and A4 than crabs in A1. The enzymatic activities of GST and CAT showed significant difference (P<0.05) between the sampling areas, similar to that observed for gill alterations. The biomarkers analyzed showed that the crabs are under different impact levels (A4> A3> A2> A1) along the São Marcos Bay.(AU)

Brain biomarkers in tench ( Tinca tinca L.) after semi-static exposure to the pesticide carbofuran / Biomarcadores cerebrales en tenca (Tinca tinca L.) tras una exposición semiestática al pesticida carbofurano / Biomarcadores cerebrais na tenca (Tinca tinca L.) após uma exposição semi-estática ao pesticida carbofurano

Abstract Background: The aquatic environment is continuously being contaminated with toxic chemical substances from industrial, agricultural and domestic activities. The identification of different biomarkers of such contamination is of great relevance to determine the potential impact of those xenobiotics on the health of organisms. Objectives: To estimate the suitability of different biochemical brain biomarkers from tench in order to evaluate the environmental effect of an exposition to different concentrations of the pesticide carbofuran. Methods: The present study focused on the effect of a long-term exposure (28 days) to different concentrations (50, 100 and 200 μg/L) of the pesticide carbofuran on certain biochemical parameters of tench (Tinca tinca L.). Selected biomarkers for stress monitoring were malondialdehyde (MDA), as index of lipid peroxidation, and reduced glutathione (GSH). Moreover, acetylcholinesterase (AChE) activity was quantified as biomarker of effect on fish nervous system. Results: AChE activity was significantly inhibited in fish exposed to all concentrations of carbofuran after 14 and 21 days of exposure, returning to basal levels after this period with 50 and 100 μg/L. Moreover, significant decreases of MDA levels could be detected after 14 and 21 days of exposure to 200 μg/L, lasting until the end of the experiment. GSH levels decreased after 14 and 21 days of exposure to 100 and 200 μg/L; nevertheless, GSH recovered basal levels at the end of the experiment. Conclusion: All the three biochemical parameters assessed -mainly inhibition of AChE activity- could be adequate biomarkers of early exposition (less than 14 days) to low doses of carbofuran in biomonitoring programs, being MDA reduction also related to longer exposure.

Resumen Antecedentes: El ambiente acuático está continuamente contaminado con sustancias químicas tóxicas provenientes de actividades industriales, agrícolas y domésticas. La identificación de diferentes biomarcadores de dicha contaminación es de gran relevancia para determinar el impacto potencial de esos xenobióticos en la salud de los organismos. Objetivo: Estimar la idoneidad de diferentes biomarcadores cerebrales bioquímicos de tenca para evaluar el efecto ambiental de una exposición a diferentes concentraciones del pesticida carbofurano. Método: El presente estudio se centró en los efectos de una exposición a largo plazo (28 días) a diferentes concentraciones (50, 100 y 200 μg/L) del pesticida carbofurano sobre determinados parámetros bioquímicos de la tenca (Tinca tinca L.). Los biomarcadores seleccionados para el control del estrés fueron el malondialdehído (MDA), como indicador de peroxidación lipídica, y el glutatión reducido (GSH). Además, se cuantificó la actividad acetilcolinesterasa (AChE), como biomarcador de efecto sobre el sistema nervioso del pez. Resultados: La actividad AChE se inhibió significativamente en los peces expuestos a todas las concentraciones de carbofurano después de 14 y 21 días de exposición, regresando a los niveles basales tras este periodo en las exposiciones con 50 y 100 μg/L. Así mismo se detectaron descensos significativos de los niveles de MDA tras 14 y 21 días de exposición con 200 μg/L, manteniéndose hasta el final del experimento. Los niveles de GSH descendieron tras 14 y 21 días de exposición con 100 y 200 µg/l; sin embargo, los niveles basales se recuperaron al final del experimento. Conclusión: Los tres parámetros bioquímicos evaluados, pero principalmente la inhibición de la actividad de AChE, podrían usarse como biomarcadores de exposición temprana (menos de 14 días) a bajas dosis de carbofurano en programas de biomonitorización, estando la reducción de MDA también relacionada con exposiciones más prolongadas.

Resumo Antecedentes: O meio aquático está sendo continuamente contaminado com substâncias químicas tóxicas de atividades industriais, agrícolas e domésticas. A identificação de diferentes biomarcadores de tal contaminação é de grande relevância para determinar o impacto potencial desses xenobióticos na saúde dos organismos. Objetivo: Estimativa da idoneidade de várias biomarcadores cerebrais bioquímicos de tenca para avaliar o efeito ambiental de uma exposição a diferentes concentrações do pesticida carbofurano. Método: O presente estudo centrou-se no efeito de uma exposição a longo prazo (28 dias) a diferentes concentrações (50, 100 e 200 μg/L) do pesticida carbofurano em certos parâmetros bioquímicos da tenca (Tinca tinca L.). Os biomarcadores selecionados para o monitoramento do estresse foram malondialdeído (MDA), como índice de peroxidação lipídica e glutationa reduzida (GSH). Além disso, a atividade da acetilcolinesterase (AChE) foi quantificada, como biomarcador de efeito sobre o sistema nervoso do peixe. Resultados: A atividade de AChE foi significativamente inibida em peixes expostos a todas as concentrações de carbofurano após 14 e 21 dias de exposição, voltando aos níveis basais após esse período com 50 e 100 μg/L. Além disso, as diminuições significativas dos níveis de MDA podem ser detectadas após 14 e 21 dias de exposição a 200 μg/L, até o final do experimento. Os níveis de GSH diminuíram após 14 e 21 dias de exposição a 100 e 200 μg/L, porém GSH recuperou os níveis basais no final do experimento. Conclusão: Todos os três parâmetros bioquímicos avaliados, mas principalmente a inibição da atividade AChE, podem ser biomarcadores adequados de exposição precoce (menos de 14 dias) a baixas doses de carbofurano em programas de biomonitorização, sendo a redução de MDA também relacionada a exposições mais longas.

Estudo da expressão gênica dos principais metabolizadores de fase II de xenobióticos: GSTM1, GSTP1 e GSTT1 em carcinoma de células escamosas bucal / Study of the gene expression of the main xenobiotic phase II metabolizers: GSTM1, GSTP1 and GSTT1 in squamous cell carcinoma of the oral cavity

Tabaco e álcool são considerados os principais fatores de risco para o carcinoma de células escamosas (CCE) bucal contribuindo de maneira desfavorável para o tratamento e desfecho clínico. Seus carcinógenos são metabolizados em duas fases, sendo a segunda fase realizada pelas Glutationa S-transferases (GSTs). O objetivo do presente estudo foi avaliar a expressão gênica da forma selvagem dos genes GSTM1, GSTP1 e GSTT1 por qPCR em 33 amostras de CCE bucal de fumantes, ex-fumantes e não fumantes, e 15 controles em busca de uma correlação clínica com consumo de tabaco, álcool e estadiamento clínico. A dependência nicotínica foi avaliada pelo Teste de Fagerström pra Dependência a Cigarros (TFDC) e para consumo de etílicos o Teste AUDIT. Foi observado aumento da expressão de GSTM1 no Grupo CCE fumante em relação ao Grupo Controle (p=0,0161). Contrariamente, foi encontrada uma menor expressão de GSTT1 no Grupo CCE fumante em relação ao Grupo Controle fumante (p=0,0183). No grupo CCE fumante não foi encontrada uma correlação entre a expressão dos genes estudados e fatores ligados ao tabagismo, etilismo e estadiamento clinico. No grupo Controle fumante, houve correlação entre teste AUDIT e a expressão de GSTM1 (p=0,0000). Para GSTP1 e GSTT1 houve correlação entre a expressão quando comparada a idade do paciente (p=0,0008; p=0,0095), idade de inicio do tabagismo (p=0,0033; p=0,0081), TFDC (p=0,0102; p=0,0085) e AUDIT (p=0,0052; p=0,0219) respectivamente. Para GSTT1 foi encontrada uma correlação entre a expressão e número de cigarros/dia (p=0,0175). Concluímos que as formas selvagens das GSTs estudadas apresentaram uma alta expressão nas amostras de CCE bucal, entretanto, quantitativamente essa expressão foi baixa, com grande variabilidade interindividual. Outrossim, não houve uma correlação direta entre níveis de expressão, carga tabágica, TFDC, teste AUDIT e estadiamento clínico. O aumento da expressão de GSTM1 e GSTP1 parece não ter tido um efeito protetor. A baixa expressão de GSTT1 em pacientes fumantes com CCE bucal se mostrou um potencial marcador a ser avaliado em pacientes fumantes que ainda não desenvolveram uma neoplasia maligna(AU)

Tobacco and alcohol are considered to be the main risk factors for oral squamous cell carcinoma (SCC), contributing to treatment and clinical outcome. Its carcinogens are metabolized in two phases, being the second phase carried out by Glutathione Stransferases (GSTs). The objective of the present study was to evaluate the wild-type gene expression of the GSTM1, GSTP1 and GSTT1 genes by qPCR in 33 samples of oral SCC from smokers, former smokers and nonsmokers, and 15 controls looking for a clinical correlation with tobacco and alcohol consumption and clinical staging. Nicotinic dependence was assessed by the Fagerström Test for Cigarette Dependence (TFCD) and alcohol consumption by the AUDIT Test. Increased expression of GSTM1 in the Smoker SCC Group was observed in relation to the Control Group (p=0.0161). Conversely, a lower expression of GSTT1 was found in the smoker SCC group compared to the Smoker Control Group (p=0.0183). In the smoker SCC group, no correlation was found between the genes expression studied and factors related to smoking, alcoholism and clinical staging. In the Smoker Control Group, there was a correlation between the AUDIT test and the GSTM1 expression (p=0.0000). For GSTP1 and GSTT1, there was a correlation between the expression compared with the patient's age (p=0.0008, p=0.0095), age of starting smoking (p=0.0033, p=0.0081), FTCD (p=0.0102, p=0.0085) and AUDIT (p=0.0052, p=0.0219) respectively. For GSTT1 a correlation was found between expression and number of cigarettes/day (p=0.0175). We concluded that the wild forms of the GSTs studied presented a high expression in the samples of oral SCC; however, quantitatively this expression was low, with great interindividual variability. Also, there was no direct correlation between levels of expression, pack-years, FTCD, AUDIT Test and clinical stage. Increased expression of GSTM1 and GSTP1 appears to have had no protective effect. The low GSTT1 expression in smokers with oral SCC was shown to be a potential marker to be evaluated in smoker patients who have not yet developed a malignant neoplasm(AU)

Biodegradation of the fungicide carbendazim by bacteria from Coriandrum sativum L rhizosphere / Biodegradação do agrotóxico carbendazim por bactérias da rizosfera de Coriandrum sativum L

The biocidal agrochemicals commonly used in agriculture can remain in the soil, affecting the environmental conditions and causing serious risks to health. Knowing that soil microorganisms, especially those from the rhizosphere, can degrade environmental xenobiotics, it was evaluated the potential of bacteria isolated from Coriandrum sativum L. rhizosphere to biodegrade carbendazim (MBC), a fungicide extensively used by agriculturists from rural farming communities in Manaus, Amazonas. Cultures carried out in medium containing carbendazim as a sole carbon source enabled the isolation of 80 bacteria, in the established conditions. Assays to determine degradation potential allowed the selection of the two elite isolates identified as Stenotrophomonas sp. and Ochrobactrum sp. Quantitative assays with each strain individually or in consortium, were carried out using minimal salt medium added with carbendazim (250 µg mL-1) and incubated at 30°C, under agitation (125 rpm) for 21 days. Samples used in the biodegradation test were HPLC analyzed for final fungicide quantitation. The Stenotrophomonas sp. strain was more efficient (68.9%) to degrade carbendazim and showed no toxicity in tests with Artemia salina.

Agrotóxicos são comumente utilizados na produção agrícola, podendo persistir no solo, afetar a qualidade do ambiente e causar sérios riscos à saúde. Sabendo-se que micro-organismos do solo, principalmente aqueles da rizosfera, podem degradar produtos xenobióticos avaliou-se o potencial de bactérias isoladas da rizosfera de Coriandrum sativum L. em degradar carbendazim, um fungicida usado extensivamente em comunidades de agricultores rurais em Manaus, Amazonas. Procedimentos de cultivo em meio, contendo carbendazim como única fonte de carbono, mostraram que 80 bactérias cresceram nas condições estabelecidas. Ensaios de eficiência de degradação permitiram a seleção dos dois melhores isolados que foram identificados como Stenotrophomonas sp. e Ochrobactrum sp. Os ensaios quantitativos, com cada cepa individualmente e com as duas em consórcio, foram conduzidos em meio mínimo contendo sais, acrescido de carbendazim (250 µg mL-1) e incubados a 30°C, 125 rpm, por 21 dias. A quantificação final do fungicida nas amostras do ensaio de biodegradação foi realizada em HPLC. A linhagem Stenotrophomonas sp. apresentou maior eficiência, degradando 68,9% do total de carbendazim e não apresentou toxicidade nos testes realizados com Artemia salina.

[The biomonitoring of toxic substances in biological samples of general population]. / La biomonitorización de sustancias tóxicas en muestras biológicas de población general.

Many of the world's most developed countries have adopted biomonitoring of toxic substances in order to ascertain their levels in biological samples. These substances get into the body through different environmental exposures. Monitoring toxic substances in biological samples should allow us to ascertain their levels in vulnerable groups, assess their evolution over time, make comparisons with levels observed in other countries, identify groups at risk or with high toxic levels and promote research. The main objective of biomonitoring is to act as a policy design tool to facilitate the implementation of particular measures in various sectors: health, environmental, agricultural and livestock or food industry sectors. In Spain, information on levels of toxic substances of environmental origin is provided by specific studies on health effects from environmental sources, such as the INMA project (INfancia y Medio Ambiente [childhood and environment]). In addition, biomonitoring projects have been implemented in Catalonia and the Canary Islands, together with a national biomonitoring programme in the adult working population. However, further progress is needed to develop a system that covers the general population as well as subgroups at risk, which relies on the collaboration of the involved authorities and the participation of professionals from different sectors and citizen organisations interested in the relationship between health and the environment.

El sistema citocromo P450 y el metabolismo de xenobióticos / Cytochrome P450 system and xenobiotic metabolism

Los organismos están constantemente expuestos a una gran variedad de xenobióticos. Las enzimas citocromo P450 participan en la fase I del metabolismo de xenobióticos, incluyendo los fármacos, y en funciones biosintéticas endógenas por reacciones de oxidación, reducción e hidrólisis. En el hombre se estima que pueden metabolizar hasta dos tercios de las drogas y la mayor parte de estas reacciones ocurre en el hígado. Estas enzimas se encuentran en todos los reinos biológicos. Actualmente se conocen más de 18 000 genes citocromo P450 organizados en familias y subfamilias según el porcentaje de identidad de secuencia de sus aminoácidos, y este número aumenta cada año con el hallazgo de nuevas secuencias del genoma. Ellas son una superfamilia de hemoproteínas monooxidasas del sistema oxidasa de función mixta localizadas en las membranas del retículo endoplasmático liso y mitocondrial interna. La diversidad de reacciones que cataliza y su amplia especificidad de sustrato lo destacan como uno de los catalizadores más diversos y versátiles conocidos y juega un papel crítico en la bioquímica, farmacología y toxicología. Se realizó una búsqueda por palabras clave en las bases de datos Pubmed y Medscape en los últimos diez años. También se consultaron sitios de Internet relacionados con investigaciones del citocromo P450 como bases de datos. Esta revisión es una actualización sobre aspectos generales del citocromo P450 y comprende una breve historia de la investigación del citocromo P450, su sistema de nomenclatura estándar; y describe su multiplicidad, la distribución a nivel de órgano y localización subcelular, estructura y función(AU)

The organisms are constantly exposed to a wide array of xenobiotics. Cytochrome P450 enzymes are involved in the phase I of xenobiotic metabolism, including pharmaceuticals, and in endogenous biosynthetic functions through oxidation, reduction reactions and hydrolysis. It is estimated that cytochrome P450 can metabolize up to two-thirds of drugs present in humans and that the bulk of these reactions occur in the liver. These enzymes are found in all biological domains. More than 18 000 cytochrome P450 genes are currently known and arranged into families and subfamilies on the basis of amino acid sequence identity percentage, and this number increases each year as new genome sequences are reported. They are a superfamily of monooxidase hemoproteins in the oxidase system with mixed functions and found on the membranes of the smooth endoplasmic reticulum and in the inner mitochondrial membrane. The diversity of reactions that catalyzes and its extensive substrate specificity turn it into one of the most diverse and versatile catalysts ever known and plays a critical role in biochemistry, pharmacology and toxicology. A keyword search was performed in Pubmed and Medscape databases in the last ten years. Websites related to cytochrome P450 research as databases were also consulted. This updated review covered general aspects of cytochrome P450, a brief history of the research on this enzyme and its standard nomenclature system, and also described its multiplicity, its distribution in body organs and its sub-cellular location, structure and function(AU)

El sistema citocromo P450 y el metabolismo de xenobióticos / Cytochrome P450 system and xenobiotic metabolism

Los organismos están constantemente expuestos a una gran variedad de xenobióticos. Las enzimas citocromo P450 participan en la fase I del metabolismo de xenobióticos, incluyendo los fármacos, y en funciones biosintéticas endógenas por reacciones de oxidación, reducción e hidrólisis. En el hombre se estima que pueden metabolizar hasta dos tercios de las drogas y la mayor parte de estas reacciones ocurre en el hígado. Estas enzimas se encuentran en todos los reinos biológicos. Actualmente se conocen más de 18 000 genes citocromo P450 organizados en familias y subfamilias según el porcentaje de identidad de secuencia de sus aminoácidos, y este número aumenta cada año con el hallazgo de nuevas secuencias del genoma. Ellas son una superfamilia de hemoproteínas monooxidasas del sistema oxidasa de función mixta localizadas en las membranas del retículo endoplasmático liso y mitocondrial interna. La diversidad de reacciones que cataliza y su amplia especificidad de sustrato lo destacan como uno de los catalizadores más diversos y versátiles conocidos y juega un papel crítico en la bioquímica, farmacología y toxicología. Se realizó una búsqueda por palabras clave en las bases de datos Pubmed y Medscape en los últimos diez años. También se consultaron sitios de Internet relacionados con investigaciones del citocromo P450 como bases de datos. Esta revisión es una actualización sobre aspectos generales del citocromo P450 y comprende una breve historia de la investigación del citocromo P450, su sistema de nomenclatura estándar; y describe su multiplicidad, la distribución a nivel de órgano y localización subcelular, estructura y función(AU)

The organisms are constantly exposed to a wide array of xenobiotics. Cytochrome P450 enzymes are involved in the phase I of xenobiotic metabolism, including pharmaceuticals, and in endogenous biosynthetic functions through oxidation, reduction reactions and hydrolysis. It is estimated that cytochrome P450 can metabolize up to two-thirds of drugs present in humans and that the bulk of these reactions occur in the liver. These enzymes are found in all biological domains. More than 18 000 cytochrome P450 genes are currently known and arranged into families and subfamilies on the basis of amino acid sequence identity percentage, and this number increases each year as new genome sequences are reported. They are a superfamily of monooxidase hemoproteins in the oxidase system with mixed functions and found on the membranes of the smooth endoplasmic reticulum and in the inner mitochondrial membrane. The diversity of reactions that catalyzes and its extensive substrate specificity turn it into one of the most diverse and versatile catalysts ever known and plays a critical role in biochemistry, pharmacology and toxicology. A keyword search was performed in Pubmed and Medscape databases in the last ten years. Websites related to cytochrome P450 research as databases were also consulted. This updated review covered general aspects of cytochrome P450, a brief history of the research on this enzyme and its standard nomenclature system, and also described its multiplicity, its distribution in body organs and its sub-cellular location, structure and function(AU)

Effects of the 2, 4-D herbicide on gills epithelia and liver of the fish Poecilia vivipara / Efeitos do herbicida 2, 4-D no epitélio das brânquias e no fígado do peixe Poecilia vivípara

The 2,4-dichlorophenoxyacetic acid, usually named 2,4-D is one of the most widely used herbicides in the world. Acute toxicity of 2,4-D herbicide was investigated through its effects on guppies (Poecilia vivipara Bloch et Schneider 1801). Fish were exposed to the herbicide at concentrations of 10, 20 and 40µl per liter of water for 24 hours to determine its effects on gills and liver epithelia. The estimated LC50 was 34.64µl of 2,4-D per liter of water. Histochemical analyses and Feulgen's reaction were conducted to detect glycoconjugates and DNA, respectively, in gills and liver epithelia. Histochemistry revealed qualitative variations of glycoconjugates present on mucous cells and granules. The four types of mucous cells contained neutral granules, acids, or both. Increasing amounts of syalomucins were observed from the control group to the group exposed to the highest concentration of 2,4-D, suggesting increased mucous viscosity and the formation of plaques that could inhibit gas exchange and osmoregulation. Lamellar fusion observed in the group exposed to 40µl of 2,4-D suggests a defense mechanism. Hepatocytes showed vacuolization in the 10 and 20µl/L groups. The 40 µl/L group showed normal hepatocytes as well as changed ones, many Ito cells, micronuclei, and nuclear swelling. These effects may be associated with toxicity or adaptative processes to cellular stress. The data from this study indicates the importance of assessing similar risks to aquatic species and suggests that Poecilia vivipara is an adequate biological model for analysis of environmental contamination.

A toxicidade aguda do herbicida 2,4-D foi investigada através dos efeitos no peixe Poecilia vivípara (Bloch et Schneider, 1801). Grupos de peixes foram expostos ao herbicida nas concentrações de 10, 20 e 40µl por litro de água, durante 24 horas. As brânquias e o fígado foram estudados. A concentração letal média (CL50) do herbicida para a espécie em questão foi de 34,64µl/l. Foram realizadas colorações histoquímicas e coloração de Feulgen para identificar glicoconjugados e DNA, respectivamente, nos tecidos acima citados. Os métodos histoquímicos revelaram os tipos de glicoconjugados presentes nas células mucosas e nos grânulos. Os quatro tipos de células mucosas apresentaram glicoconjugados neutros, ácidos, ou ambos em um mesmo tipo celular. Observou-se a presença crescente de sialomucinas do grupo controle até o grupo exposto a maior concentração de 2,4-D, sugerindo aumento da viscosidade do muco e, consequentemente, formação de placas que impedem as trocas gasosas e a osmorregulação. A fusão lamelar observada no grupo exposto a 40µl de 2,4-D sugere ser um mecanismo de defesa. Os hepatócitos apresentaram processo de vacuolização nos grupos 10 e 20µl/l. No grupo de 40µl/l, observou-se a presença de células de Ito, micronúcleos e hepatócitos normais e outros com edema nuclear. Este estudo indica a importância da avaliação de riscos semelhantes a espécies aquáticas e sugere a espécie Poecilia vivipara como modelo biológico adequado para análises de contaminação ambiental.

Biodisponibilidad de compuestos bioactivos en alimentos / Bioavailability of bioactive compounds in foods

Antecedentes: en la actualidad ha cobrado gran relevancia el conocimiento de los compuestos bioactivos alimentarios beneficiosos para la salud. Estos deben acceder a los tejidos a través de la circulación sanguínea, y su biodisponibilidad depende de múltiples factores. Objetivo: describir algunos aspectos relevantes relacionados con la evaluación de la biodisponibilidad de compuestos bioactivos, que determina su capacidad para ejercer los efectos saludables. Metodología: se describen aspectos básicos relacionados con la medición de la biodisponibilidad de compuestos bioactivos ingeridos en la dieta, su significado y algunas claves para interpretar los resultados de su medición. Para ello se analiza bibliografía científica relevante en el tema en las bases de datos Thomson y Scielo, y libros con comité editorial. Resultados: la biodisponibilidad es una herramienta útil para conocer si los compuestos bioactivos alimentarios son capaces de llegar a los sistemas en los cuales ejercen sus efectos beneficiosos. Depende de factores propios del sujeto, otros propios de la matriz alimentaria que los contiene, e incluso son inherentes al tipo de microflora intestinal. Conclusión: los métodos tradicionales de medición de la biodisponibilidad, a partir de niveles plasmáticos y de excreción urinaria de las moléculas bioactivas presentes en los alimentos, deben considerar una amplia variedad de factores para lograr una interpretación adecuada de los resultados.

Background: The knowledge of bioactive phytochemicals contained in foods, which may exert beneficial health effects, is of great importance in current nutrition. Bioactive phytochemicals must reach the tissues in which they act through the blood circulation, and their bioavailability depends on various factors. Aim: To describe some relevant issues related with the determination of the bioavailability of bioactive compounds, a major factor that determines their capacity to exert beneficial effects. Methodology: Some basic aspects of the determination of the bioavailability of bioactive food components are described, and key issues to understand the results observed are discussed, based on relevant bibliographic resources Thomson, Scielo databases and edited books. Results: Bioavailability constitutes a useful tool to know if bioactives in foods are able to reach the body systems on which they exert their beneficial effects. Bioavailability is dependent on various factors, including the physiology of the subject, the food matrix, and even the type of intestinal microbiota. Conclusion: The traditional methods used to determine bioavailability, that include plasmatic and urinary levels of the bioactive molecules in foods, should take into consideration a variety of factors in order to make an adequate interpretation of the results.

Nullity of GSTT1/GSTM1 related to pesticides is associated with Parkinson's disease / Nulidade de GSTT1/GSTM1 relacionada a pesticidas associa-se com doenca de Parkinson

Genetic and environmental factors affect the pathogenesis of Parkinson's disease (PD). Genetic variants of the enzyme glutathione S-transferases (GST) may be related to the disease. This study aimed to evaluate the influence of genetic variants of GST (GSTT1/GSTM1) and their association with the exposure to environmental toxins in PD patients. We studied 254 patients with PD and 169 controls. The GSTM1/GSTT1 variants were analyzed by polymerase chain reaction. We applied the Fisher's exact test and the χ2 test for statistical analysis (p<0.05). The present and absence for GSTT1 and GSTM1 were similar in patients and controls. The null for GSTT1 and GSTM1 (0/0) and exposure to pesticides prevailed in patients (18%) compared to controls (13%, p=0.014). This study suggests the association between PD and previous exposure to pesticides, whose effect may be enhanced in combination with null for GSTT1/GSTM1.

Fatores genéticos e ambientais influenciam a patogênese da doença de Parkinson (DP). Variantes genéticas das enzimas glutationa S-transferases (GST) parecem estar envolvidas com a doença. Os objetivos deste estudo foram avaliar a influência de variantes genéticas de GST (GSTT1/GSTM1) e sua associação com exposição a toxinas ambientais em pacientes com DP. Foram estudados 254 pacientes com DP e 169 controles. As variantes para GSTM1/GSTT1 foram analisadas por reação em cadeia da polimerase. Para análise estatística foram aplicados os testes de Fisher e do χ2 (p<0,05). Tanto a presença quanto a nulidade para GSTT1 e GSTM1 foram semelhantes em pacientes e controles. A nulidade para GSTT1 e GSTM1 (0/0) e contato com agrotóxicos prevaleceu nos pacientes (18%) em relação aos controles (13%, p=0,014). Este estudo sugere associação entre DP e contato prévio com agrotóxicos, cujo efeito parece potencializado em combinação com nulidade para GSTT1/GSTM1.

Exposure to pesticides and heterozygote genotype of GSTP1-Alw26I are associated to Parkinson's disease / Exposição a pesticidas e genótipo heterozigoto de GSTP1-Alw26I associam-se à doença de Parkinson

Objective This study aimed to analyze the frequency of GSTP1-Alw26I polymorphism and to estimate its association with toxic substances in Parkinson's disease (PD). Methods A study group with 154 patients - subdivided into familial and sporadic PD groups - and 158 elderly individuals without the disease (control group) were evaluated. GSTP1-Alw26I polymorphism was analyzed by polymerase chain reaction/restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP). Results Patients were significantly more exposed to pesticides compared with the control group (p=0.0004), and the heterozygote genotype associated to exposure to pesticides also prevailed in patients (p=0.0001). Wild homozygote genotype was related to tobacco use (p=0.043) and alcoholism (p=0.033) in familial PD patients. Conclusion Exposure to pesticides is associated to PD, whose effect can be enhanced when combined with the heterozygote genotype of GSTP1-Alw26I. Also, large genetic and environmental studies considering tobacco use, alcoholism, GSTP1 and PD are necessary to confirm our findings. .

Objetivo Analisar a frequência do polimorfismo GSTP1-Alw26I, assim como estimar sua associação com substâncias tóxicas na doença de Parkinson (DP). Métodos A casuística avaliada foi composta por um grupo de estudo, com 154 pacientes, subdivididos em DP familial e esporádica, e outro com 158 idosos sem a doença (grupo controle). O polimorfismo GSTP1-Alw26I foi analisado por reação em cadeia da polimerase/polimorfismo de comprimento do fragmento de restrição (PCR/RFLP). Resultados Os pacientes foram significativamente mais expostos a pesticidas, comparados com o grupo controle (p=0,0004), e o genótipo heterozigoto associado a exposição a pesticidas também prevaleceu nos pacientes (p=0,0001). O genótipo homozigoto selvagem apresentou relação com tabagismo (p=0,043) e etilismo (p=0,033) em pacientes com DP familial. Desse modo, a exposição a pesticidas está associada à DP, cujo efeito pode ser potencializado quando combinado ao genótipo heterozigoto de GSTP1-Alw26I. Estudos genético-ambientais envolvendo tabagismo, etilismo, GSTP1 e DP devem ser realizados em casuísticas numerosas, confirmando essa associação. .

Inmunolocalización hepática de CYP P450 en un experimento de toxicidad subaguda por Clorpirifos 0,0-dietil 0-(3, 5, 6-tricloro-2-piridil fosforotioato) en machos juveniles de tilapia Oreochromis spp) / Liver immunolocation of CYP P450 in an subacute toxicity experiment with Clorpirifos o,o-(3, 5, 6- trichloride -2-pyridyl phosphorotioato in young male tilapia (Oreochromis spp) / Inmunolocalização hepática de CYP P450 num teste de toxicidade subaguda por Clorpirifos 0,0-dietil 0-(3, 5, 6-tricloro-2-piridil fosforotioato) em machos juvenis de tilápia (Oreochromis spp.)

Resumen En Colombia son escasas las técnicas de diagnóstico implementadas con biomarcadores inmunohistoquímicos para realizar biomonitoreo de contaminación ambiental. Objetivo: Implementar una técnica inmunohistoquímica para inmunolocalizar CYP 1A en tejidos de peces, luego de realizar un experimento de exposición subaguda al Clorpirifos en tilapias juveniles machos. Métodos: el experimento de dosis subletal, se realizó en un sistema semiestático, con recambio diario del 50% del volumen de agua manteniendo la concentración correspondiente en cada grupo experimental mediante la adición de la mitad de la dosis hasta el día 28. Las concentraciones de Clorpirifos para la exposición fueron 4, 8, y 12 μg/L, en los grupos tratados y 0,0 μg/L en el grupo control. Se tomaron muestras para estudio histopatológico e inmunohistoquímico. Resultados: se encontró diferencia significativa (p<0,05) para algunas lesiones en el hígado, confirmando que este es un órgano de impacto de los efectos del Clorpirifos a bajas dosis. Se verificó la inducción de CYP 1A en el hepatocitos, endotelio y células biliares tanto de los animales expuestos como en los no expuestos. Desde el punto de vista multidimensional no se encontró diferencia estadística entre los tratamientos para las variables estudiadas. Conclusión: se implementó y normalizó una técnica de inmunohistoquímica para la inmunolocalización tisular de CYP 1A, que podrá utilizarse en futuras investigaciones para realizar biomonitoreo de contaminación en las cuencas hidrográficas de Colombia.

Abstract In Colombia the diagnostic techniques for implementing immunohistochemical biomarkers to fulfill biomonitoring of environmental contamination are limited. Objective: To implement an immunohistochemical technique to immunolocate CYP 1A in the tissue of fish, performing a subacute exposition experiment of Clofopirifos in the liver of young male tilapia. Methods: the sublethal dosage was carried out in semi-static state, with a daily refill of 50% of the water volume, maintaining the corresponding concentration in each group through the addition of half of the dosage until the 28th day. The Cloropirifos concentrations for the exposition were 4, 8, and 12 μg/L in the treated groups and 0.0 μg/L in the control group. Samples were taken for histopathological and immunohistochemical study. Results: A significant difference (p<0.05) for some liver lesions, confirming that it is an organ affected by low dosages of Cloropirifos. It verified that the induction of CYP 1A in hepatocyte, endothelium and biliary cells equally in exposed animals and those that weren't exposed. From a multidimensional perspective, no statistical difference was found between the treatments for the variables under study. Conclusion: this study implemented and normalized an immunohistochemical technique for the tissue immunolocation of CYP 1A that could be used in future investigations to fulfill biomonitoring of contamination in Colombia's hydrographic basins.

Resumo Na Colômbia são escassas as técnicas de diagnóstico realizadas com biomarcadores imuno-histoquímicos para realizar biomonitoramento da contaminação ambiental. Objetivo: Estandardizar uma técnica imuno-histoquímica para fazer imunolocalização do CYP 1ª em tecidos de peixes, logo de realizar um experimento de exposição subaguda ao Clorpirifós em machos juvenis de tilápia. Métodos: O teste da dose subletal realizou-se num sistema semiestático, com recambio diário de 50% do volume de água mantendo a concentração correspondente em cada grupo experimental mediante a adição da metade da dose até o dia 28. As concentrações de Clorpirifós para a exposição dos peixes foram 4, 8 e 12 μg/L, nos grupos tratados e 0,0 μg/L no grupo controle. Tomaram-se amostras para o estudo histopatológico e imuno-histoquímico. Resultados: Encontrou-se diferença significativa (p<0.05) para lesões no fígado, confirmando que este é um órgão que recebe diretamente o impacto dos efeitos do Clorpirifos em baixas doses. Verificou-se a indução de CYP 1A nos hepatócitos, endotélio e células biliares tanto nos animais que estiveram expostos ao Clorpirifós quanto nos animais que não estiveram expostos. Desde o ponto de vista multidimensional não se encontrou diferença estadística entre os tratamentos para as variáveis estudadas. Conclusão: Estandardizou-se e normalizou-se uma técnica de imuno-histoquímica para a imunolocalização tissular de CYP 1A, que poderá se utilizada em futuras pesquisas para realizar biomonitoramento da contaminação das bacias hidrográficas da Colômbia, além disto.

El benzo(a)pireno en los alimentos y su relación con el cáncer / Benzo[a]pyrene from food and cancer

Antecedentes: el benzo(a)pireno es un hidrocarburo aromático policíclico con efectos adversos para la salud, una de las fuentes es la ingestión de alimentos, formados durante procesamiento industrial o en el hogar. Objetivo: indagar sobre la formación de benzo(a)pireno en los alimentos, su activación biológica, relación con el cáncer, contenido en los alimentos y la normativa que regula la cantidad en alimentos para humanos. Materiales y métodos: se realizó una búsqueda bibliográfica de artículos publicados en las bases de datos nacionales e internacionales. Resultados: el benzo(a)pireno ingerido con los alimentos se absorbe por el intestino, se metaboliza predominantemente en el hígado, allí se activa y puede inducir cáncer de diversa localización, como esófago, estómago, intestino, piel, vejiga, pulmón e hígado, evidenciado en estudios experimentales en animales. El benzo(a)pireno atraviesa la placenta y es potencialmente tóxico para el feto. Las cantidades en algunos alimentos exceden las máximas permitidas por la Comisión Europea entidad que periódicamente actualiza las normas sobre el tema. En Colombia no se encontró reglamentación. Conclusión: el benzo(a)pireno procedente de alimentos genera compuestos capaces de desarrollar cáncer principalmente del tracto gastrointestinal. La Comisión Europea actualiza periódicamente la normativa que regula el contenido de benzo(a)pireno en alimentos, Colombia carece de normas sobre el tema.

Background: Benzo[a]pyrene is a polycyclic aromatic hydrocarbon which has been related with adverse health outcomes. Food is a source of benzo[a]pyrene; which is produced during industrial processing or cooking. Objective: To review information about benzo(a)pyrene formation in food, biological activation, association with cancer, food content and regulation of benzo(a)pyrene content in human food. Methods: A literature search from national and international scientific databases was developed. Results: benzo[a]pyrene ingested is absorbed by the intestine metabolized and activated, predominantly, by the liver. Animal studies have associated benzo[a]pyrene with esophagus, stomach, intestine, skin, bladder, lung, and liver cancer. Benzo[a]pyrene is potentially toxic to the fetus, due to it passes trough placenta. Benzo[a]pyrene amounts in some foods exceed the maximum level allowed by the European Commission; which periodically updates legislation on this topic. In Colombia there is not regulation about benzo[a]pyrene. Conclusion: benzo[a]pyrene in food generates compounds that may be associated with cancer, mainly gastrointestinal cancer. The European Commission regularly updates regulation about benzo[a] pyrene content in foods. Colombia does not have regulation on this topic.

Frecuencia de los polimorfismos CYP1A1*2A y deleción del gen GSTM1 en pacientes con carcinoma de células escamosas de laringe en relación al hábito tabáquico: estudio piloto en Chile / Frequency of CYP1A1*2A and GSTM1 gene polymorphisms in Chilean patients with squamous cell carcinoma of the larynx in relation to smoking habit: a pilot study

Introducción: Entre los factores de riesgo para cáncer laríngeo (CL) son relevantes el consumo de tabaco y alcohol. Estos xenobióticos son metabolizados por un grupo de enzimas, entre las cuales están CYP1A1 y GSTM1, cuyas variantes polimórficas se postulan como factores de riesgo para esta enfermedad. Objetivos: Describir la frecuencia de las variantes de los polimorfismos de CYP1A1 y GSTM1 en un grupo de pacientes diagnosticados con CL. Analizar la posible correlación entre las variantes genéticas de ambas enzimas y la presencia de CL. Evaluar la influencia del hábito tabáquico en el riesgo de aparición de cáncer escamoso de laringe en pacientes con genotipos de riesgo. Material y método: Se seleccionaron 35 pacientes con CL entre los años 2000 y 2010 en Servicio de Otorrinolaringología del HBLT y 124 controles reclutados en el Centro de Investigaciones Farmacológicas y Toxicológicas (IFT). A todos los individuos se les registraron datos demográficos y extrajo una muestra de sangre para analizar las variantes polimórficas de CYP1A1 y GSTM1, mediante PCR-RFLP. Resultados: De un total de 35pacientes 54,3% presentan el genotipo GSTM1 (-/-) y 17,1% el genotipo CYP1A1*2A C/C. En el grupo control (n =140) estas frecuencias fueron de 19,35°% y 10,48%o, respectivamente. Se observó una correlación entre GSTM1 y el CL, estratificado por el hábito tabáquico y alcohólico. No se encontraron relaciones estadísticamente significativas con el hábito alcohólico y/o tabáquico. No se observaron asociaciones entre la patología y la combinación de genotipos o entre genotipos y el hábito tabáquico o alcohólico. Conclusiones: Los resultados muestran una asociación estadísticamente significativa entre la deleción de GSTM1 (-/-) y el riesgo de presentar CL, lo que refleja el importante papel que juega esta enzima en la desintoxicación de compuestos cancerígenos. Sin embargo, se requiere incrementar el número de pacientes para establecer apropiadamente la relación genético-ambiental que permite adjudicar un papel relevante a estos biomarcadores.

Introduction: Tobacco and alcohol consumption are recognized risk factors for squamous cell carcinoma of the larynx. These xenobiotics are metabolized by numerous enzymes, among which, CYP1A1 and GSTM1 gene polymorphisms have been identified as risk factors for developing tobacco related cancers as lung and laryngeal carcinomas. Nevertheless, these polymorphisms have not been studied in Chilean patients with squamous cell carcinoma of the larynx. Aim: To describe, for the first time, the frequency of CYP1A1 and GSTM1 gene polymorphisms in Chilean patients with squamous cell carcinoma of the larynx. Material and method: We conducted a case-control study. The case group consisted of 35 Chilean patients with squamous cell carcinoma of the larynx; the control group was formed by 124 Chilean subjects without cancer diagnosis. Demographic data as age, sex and quantification of tobacco smoking and alcohol consumption were recorded in all individuals. CYP1A1 and GSTM1 gene polymorphisms were evaluated by polymerase chain reaction and restriction enzymes (PCR-RFLP). Results: The frequency of CYP1A1*2A C/C genotype was 54, 3°% among laryngeal cancerpatients and 17,1%% among control subjects. The frequency ofGSTM1 (-/-) genotype was 19,35 %% among laryngeal cancer patients and 10,48%% among control subjects. There were no statistically significant relationships between this gene polymorphisms and tobacco smoking or alcohol consumption. There were no associations between the presence of both gene polymorphisms in the same individual and the presence of laryngeal cancer. Interestingly we found an OR of 8.69 (CI 2.90 to 26.01) for GSTM1 (-/-) polymorphism and laryngeal cancer, stratified by tobacco smoking and alcohol consumption. Conclusions: Our work shows that the deletion of GSTM1 could be an important risk factor for squamous cell carcinoma of the larynx in Chilean patients. This finding reflects the important role that detoxification of carcinogenic compounds plays in Chilean population. However, it is necessary to increase the number of studied patients to properly establish the genetic-environmental relationship ascribed to these biomarkers.

Estudio comparativo de la frecuencia de micronúcleos y anormalidades nucleares en eritrocitos de tres especies ícticas / Comparative studies of the frequency of micronuclei and nuclear abnormalities in erythrocytes of three species fishes

Los ecosistemas acuáticos cercanos a las zonas urbanas sufren un deterioro constante ocasionado por diversos factores físico-químicos relacionados con la actividad antrópica, representando un riesgo para los organismos que los habitan, en especial los peces. Estos efectos pueden ser biomonitoreados mediante técnicas de amplia utilización, como el Test de Micronúcleos (Mn) y el de Anormalidades nucleares (AN), entre otros. El objetivo de este trabajo fue verifcar y comparar la frecuencia de micronúcleos y anormalidades nucleares en tres especies ícticas colectadas en un lago urbano, Cyprinus carpio, Astyanax eigenmanniorum y Cheirodon interruptus. Luego de la captura y anestesia de los peces, se extrajo de cada individuo una muestra de sangre y se registró el peso y la longitud total. Las muestras fueron fjadas y luego teñidas con Giemsa al 10%, posteriormente se las analizó con microscopio (1000X) y se les tomaron fotografías con cámara digital. Se calculó, además, el índice de condición corporal (K) para cada uno de los ejemplares capturados. Se aplicó un análisis de correlación de rangos de Spearman (rs) entre frecuencia de Mn y AN vs K para cada especie. La prueba de Kruskal-Wallis se aplicó para evaluar diferencias de Mn y AN entre las especies. Los resultados no mostraron una correlación estadísticamente signifcativa (P> 0,05) entre las frecuencias de Mn y AN vs K. Las frecuencias de Mn entre las diferentes especies no arrojaron diferencias signifcativas (P> 0,05), mientras que las AN sí (P< 0,05). Astyanax eigenmanniorum fue la especie que mayor sensibilidad presentó. Las diferencias preliminares de AN entre las especies utilizadas, convierten a A. eigenmanniorum en una especie "centinela" y posible biomonitor de agentes xenobióticos.

Aquatic ecosystems near urban areas suffer a steady deterioration caused by physical and chemical factors related to human activity, representing a danger to organisms that inhabit them, especially the fsh. These effects may be biomonitored by widely used techniques, such as the Micronucleus Test (Mn) and Nuclear Abnormalities (NA), among others. The aim of this study was to verify and compare the frequency of micronuclei and nuclear abnormalities in three fsh species collected in an urban lake, Cyprinus carpio, Astyanax eigenmanniorum and Cheirodon interruptus. After the capture and anesthesia of the fsh, weight and length were registered, and a blood sample was obtained from each individual. The samples were fxed and stained with 10% Giemsa, subsequently they were analyzed with the microscope (1000X) and photographed with a digital camera. The body con-dition index (K) was calculated for each fsh caught. A correlation analysis Spearman rank (rs) between frequency of Mn and NA vs. K was performed for each species. The Kruskal-Wallis test was applied to assess differences in Mn and NA between species. The results showed no statistically signifcant correlation (P> 0.05) between the frequencies of Mn and NA vs K. The frequencies of Mn between different species yielded no signifcant differences (P> 0.05), whereas NA (P <0.05) did. A. eigenmanniorum was the most sensitive species. NA preliminary differences between the species used, convert A. eigenmanniorum in a sort of "sentinel specie" and a possible biomonitor of xenobiotic agents.

Estudio comparativo de la frecuencia de micronúcleos y anormalidades nucleares en eritrocitos de tres especies ícticas / Comparative studies of the frequency of micronuclei and nuclear abnormalities in erythrocytes of three species fishes

Los ecosistemas acuáticos cercanos a las zonas urbanas sufren un deterioro constante ocasionado por diversos factores físico-químicos relacionados con la actividad antrópica, representando un riesgo para los organismos que los habitan, en especial los peces. Estos efectos pueden ser biomonitoreados mediante técnicas de amplia utilización, como el Test de Micronúcleos (Mn) y el de Anormalidades nucleares (AN), entre otros. El objetivo de este trabajo fue verifcar y comparar la frecuencia de micronúcleos y anormalidades nucleares en tres especies ícticas colectadas en un lago urbano, Cyprinus carpio, Astyanax eigenmanniorum y Cheirodon interruptus. Luego de la captura y anestesia de los peces, se extrajo de cada individuo una muestra de sangre y se registró el peso y la longitud total. Las muestras fueron fjadas y luego teñidas con Giemsa al 10%, posteriormente se las analizó con microscopio (1000X) y se les tomaron fotografías con cámara digital. Se calculó, además, el índice de condición corporal (K) para cada uno de los ejemplares capturados. Se aplicó un análisis de correlación de rangos de Spearman (rs) entre frecuencia de Mn y AN vs K para cada especie. La prueba de Kruskal-Wallis se aplicó para evaluar diferencias de Mn y AN entre las especies. Los resultados no mostraron una correlación estadísticamente signifcativa (P> 0,05) entre las frecuencias de Mn y AN vs K. Las frecuencias de Mn entre las diferentes especies no arrojaron diferencias signifcativas (P> 0,05), mientras que las AN sí (P< 0,05). Astyanax eigenmanniorum fue la especie que mayor sensibilidad presentó. Las diferencias preliminares de AN entre las especies utilizadas, convierten a A. eigenmanniorum en una especie "centinela" y posible biomonitor de agentes xenobióticos.(AU)

Aquatic ecosystems near urban areas suffer a steady deterioration caused by physical and chemical factors related to human activity, representing a danger to organisms that inhabit them, especially the fsh. These effects may be biomonitored by widely used techniques, such as the Micronucleus Test (Mn) and Nuclear Abnormalities (NA), among others. The aim of this study was to verify and compare the frequency of micronuclei and nuclear abnormalities in three fsh species collected in an urban lake, Cyprinus carpio, Astyanax eigenmanniorum and Cheirodon interruptus. After the capture and anesthesia of the fsh, weight and length were registered, and a blood sample was obtained from each individual. The samples were fxed and stained with 10% Giemsa, subsequently they were analyzed with the microscope (1000X) and photographed with a digital camera. The body con-dition index (K) was calculated for each fsh caught. A correlation analysis Spearman rank (rs) between frequency of Mn and NA vs. K was performed for each species. The Kruskal-Wallis test was applied to assess differences in Mn and NA between species. The results showed no statistically signifcant correlation (P> 0.05) between the frequencies of Mn and NA vs K. The frequencies of Mn between different species yielded no signifcant differences (P> 0.05), whereas NA (P <0.05) did. A. eigenmanniorum was the most sensitive species. NA preliminary differences between the species used, convert A. eigenmanniorum in a sort of "sentinel specie" and a possible biomonitor of xenobiotic agents.(AU)

Conceitos e derivação de valores de referência para biomonitorização humana de contaminantes ambientais / Concepts and determination of reference values for human biomonitoring of environmental contaminants

Human biomonitoring (HBM) of environmental contaminants plays an important role in estimating exposure and evaluating risk, and thus it has been increasingly applied in the environmental field. The results of HBM must be compared with reference values (RV). The term "reference values" has always been related to the interpretation of clinical laboratory tests. For physicians, RV indicate "normal values" or "limits of normal"; in turn, toxicologists prefer the terms "background values" or "baseline values" to refer to the presence of contaminants in biological fluids. This discrepancy leads to the discussion concerning which should be the population selected to determine RV. Whereas clinical chemistry employs an altered health state as the main exclusion criterion to select a reference population (that is, a "healthy" population would be selected), in environmental toxicology the exclusion criterion is the abnormal exposure to xenobiotics. Therefore, the choice of population to determine RV is based on the very purpose of the RV to be determined. The present paper discusses the concepts and methodology used to determine RV for biomarkers of chemical environmental contaminants.